綠化夏季降低組培苗污染的五項措施
- 發布時間:2019-11-11
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在植物組織培養過程中,污染是不可避免的,但可以把污染控制在低限度內。污染通常是由于環境不潔、培養基和培養材料消毒不徹底、操作過程不慎、操作人員或工具帶菌而引起。組培污染既影響了繁殖速度,又增加了生產成本,嚴重時可造成培養材料的丟失,給組培繁殖帶來較大的損失。
污染的病原有細菌和真菌兩大類。夏季溫度高、濕度大,各種病原菌繁殖速度快,是組培污染的高發期,如果控制不好,導致污染嚴重,會造成較大的經濟損失,甚至會前功盡棄。因此,在夏季防止和降低污染是組培工作者的重要工作之一,應予以足夠重視。根據多年實踐工作的積累,下面討論降低污染的五項有效措施。
1. 保持干凈整潔的環境是減少污染的基本要求.
組培室是一個微環境,保持這個微環境的干凈、整潔,能有效的防止污染。具體要做到:每周對整個組培室進行一次徹底的大掃除;接種室和培養室要求密閉、干燥,保持與外界環境相對隔絕的狀態,盡量減少與外界的空氣對流及微生物與塵埃的侵入。控制好光、溫、濕、氣等各種生態因子,夏季高溫、高濕時,要即時降溫和排濕;定期用消毒液對接種室和培養室內的設備、墻壁及地面進行擦洗;經常用 70%的酒精對接種室和培養室進行噴霧降塵;定期用紫外燈對接種室和培養室進行空氣消毒,每次開啟 30-50 分鐘;定期檢查超凈工作臺上的風速和清洗過濾器。
2. 潔凈的培養容器和培養基的徹底滅菌是減少污染的必然要求.
培養瓶、試管等容器和封口用的蓋子、耐高溫的塑料膜等物品在用前要經過徹底清洗、晾干。配制好的培養基分裝后應立即高壓蒸汽滅菌,即在1.1kg/cm2 的壓力,鍋內溫度達到 121℃,持續保持 20-30 分鐘。經滅菌后的培養基,放置 2-3 天,若培養基表面和內部無任何細菌痕跡,確實證明已徹底滅菌,方可使用。
3. 嚴格規范且熟練的無菌操作過程是減少污染的關鍵.
在無菌操作過程中,工作人員嚴格按照無菌操作的要求,規范熟練地完成好每一個步驟,能有效地減少由操作引起的污染。具體要做到:
?。?)接種前,工作人員的雙手必須用肥皂水洗凈,進入接種室后換上工作服、戴上口罩,用 70%的酒精擦拭消毒雙手;
?。?)用 70%的酒精擦拭超凈工作臺,接種工具(如剪刀、手術刀、鑷子等)使用前要在 70%酒精中浸泡,再在火焰上灼燒,冷卻后使用;
?。?)在超凈工作臺上正確擺放接種用具、培養材料和培養基,臺面上的東西不能堆放太多,以免影響氣流;
(4)接種過程中應避免他人來回走動,操作人員禁止談話,并盡量避免操作人員頭部伸入超凈工作臺的工作區內;
?。?)培養瓶的開啟、接種材料的切割、分裝、封口等步驟要規范熟練,避免交叉污染;
?。?)每切割、轉接完一瓶母種材料后,要及時更換無菌紙,重新更換所用的接種工具,備兩套交替使用。
4. 培養材料(外植體和基礎母瓶)的嚴格篩選和徹底的表面消毒是減少污染的基礎工作.
選擇適宜的外植體材料常常是組培工作成敗的關鍵,通常選取生長健壯、無病斑的植株上的處于生長活躍狀態的幼嫩莖尖,尤以剛剛萌發的幼芽比較理想,可以大大減少材料的污染。夏季避免陰雨天在戶外采取外植體,因為陰雨天帶菌較多,在晴天采材料時,下午采取的外植體要比早晨采的污染少,因為材料經過日曬后可殺死部分細菌或真菌。采集回來的外植體經自來水清洗后,在超凈工作臺上對其進行徹底的表面消毒,在消毒過程中應當正確選擇消毒劑的濃度和處理時間,做到既消毒徹底,又盡量減少由消毒劑引起的組織的死亡。基礎母瓶擴繁過程中,母瓶的選擇也至關重要,帶菌的母瓶不能再用作母種,避免污染的擴大,接種前,還應用 70%酒精擦拭母瓶表面,以免開啟母瓶時,灰塵落入瓶中造成污染。
5. 污染物的正確處理是防止污染傳播蔓延的有效途徑.
組織培養中污染是經常發生的,一旦發現培養物污染,應對其進行及時處理,否則會導致培養室環境污染,造成污染的蔓延和相互傳染。首先立即把污染物從培養室轉移出去,然后對其進行高壓消毒滅菌,再在離組培室較遠的地方清除滅過菌的污染的培養物,徹底清洗培養瓶,晾干后待用。
1. 保持干凈整潔的環境是減少污染的基本要求.
組培室是一個微環境,保持這個微環境的干凈、整潔,能有效的防止污染。具體要做到:每周對整個組培室進行一次徹底的大掃除;接種室和培養室要求密閉、干燥,保持與外界環境相對隔絕的狀態,盡量減少與外界的空氣對流及微生物與塵埃的侵入。控制好光、溫、濕、氣等各種生態因子,夏季高溫、高濕時,要即時降溫和排濕;定期用消毒液對接種室和培養室內的設備、墻壁及地面進行擦洗;經常用 70%的酒精對接種室和培養室進行噴霧降塵;定期用紫外燈對接種室和培養室進行空氣消毒,每次開啟 30-50 分鐘;定期檢查超凈工作臺上的風速和清洗過濾器。
2. 潔凈的培養容器和培養基的徹底滅菌是減少污染的必然要求.
培養瓶、試管等容器和封口用的蓋子、耐高溫的塑料膜等物品在用前要經過徹底清洗、晾干。配制好的培養基分裝后應立即高壓蒸汽滅菌,即在1.1kg/cm2 的壓力,鍋內溫度達到 121℃,持續保持 20-30 分鐘。經滅菌后的培養基,放置 2-3 天,若培養基表面和內部無任何細菌痕跡,確實證明已徹底滅菌,方可使用。
3. 嚴格規范且熟練的無菌操作過程是減少污染的關鍵.
在無菌操作過程中,工作人員嚴格按照無菌操作的要求,規范熟練地完成好每一個步驟,能有效地減少由操作引起的污染。具體要做到:
?。?)接種前,工作人員的雙手必須用肥皂水洗凈,進入接種室后換上工作服、戴上口罩,用 70%的酒精擦拭消毒雙手;
?。?)用 70%的酒精擦拭超凈工作臺,接種工具(如剪刀、手術刀、鑷子等)使用前要在 70%酒精中浸泡,再在火焰上灼燒,冷卻后使用;
?。?)在超凈工作臺上正確擺放接種用具、培養材料和培養基,臺面上的東西不能堆放太多,以免影響氣流;
(4)接種過程中應避免他人來回走動,操作人員禁止談話,并盡量避免操作人員頭部伸入超凈工作臺的工作區內;
?。?)培養瓶的開啟、接種材料的切割、分裝、封口等步驟要規范熟練,避免交叉污染;
?。?)每切割、轉接完一瓶母種材料后,要及時更換無菌紙,重新更換所用的接種工具,備兩套交替使用。
4. 培養材料(外植體和基礎母瓶)的嚴格篩選和徹底的表面消毒是減少污染的基礎工作.
選擇適宜的外植體材料常常是組培工作成敗的關鍵,通常選取生長健壯、無病斑的植株上的處于生長活躍狀態的幼嫩莖尖,尤以剛剛萌發的幼芽比較理想,可以大大減少材料的污染。夏季避免陰雨天在戶外采取外植體,因為陰雨天帶菌較多,在晴天采材料時,下午采取的外植體要比早晨采的污染少,因為材料經過日曬后可殺死部分細菌或真菌。采集回來的外植體經自來水清洗后,在超凈工作臺上對其進行徹底的表面消毒,在消毒過程中應當正確選擇消毒劑的濃度和處理時間,做到既消毒徹底,又盡量減少由消毒劑引起的組織的死亡。基礎母瓶擴繁過程中,母瓶的選擇也至關重要,帶菌的母瓶不能再用作母種,避免污染的擴大,接種前,還應用 70%酒精擦拭母瓶表面,以免開啟母瓶時,灰塵落入瓶中造成污染。
5. 污染物的正確處理是防止污染傳播蔓延的有效途徑.
組織培養中污染是經常發生的,一旦發現培養物污染,應對其進行及時處理,否則會導致培養室環境污染,造成污染的蔓延和相互傳染。首先立即把污染物從培養室轉移出去,然后對其進行高壓消毒滅菌,再在離組培室較遠的地方清除滅過菌的污染的培養物,徹底清洗培養瓶,晾干后待用。